产品货号:
BTN111007
中文名称:
MALDI蛋白样品处理试剂盒
英文名称:
MS Sample Preparation Kit
产品规格:
500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒用于基质辅助激光解吸离子化(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization,MALDI)分析,所含的基质液是MALDI分析的必不可少的关键成分,其主要作用一是起到分子溶剂的作用,使样品分子分开,但又不会使蛋白质发生共价修饰;而是能从激光脉冲中吸收能量,使蛋白质发生瞬间相变,用于质谱分析。
- 即开即用,用户不需要单独准备各种成分。
- 经过优化,可用于各种样品的MALDI分析。
- 可以选择CCA(羟基苯丙烯酸)、DHB(2,5-二羟基苯甲酸)和SA(芥子酸)三种不同的基质。CCA适用于分子量在5kD一下的蛋白质和多肽分析(肽指纹图谱);DHB适合于一般蛋白质、多肽、低聚糖、脂和合成多聚物的分析;SA适合分子量在3~150kD的蛋白质分析。
组分 | 规格 |
MS专用溶解液 | 50mL |
基质液成份一 | 50mg |
基质液成份二 | 10mL |
保存:室温,有效期1年。
- 样品准备
- 将蛋白样品真空冻干后加入MS专用溶解液100μL,溶解半小时(期间可以按下步配制基质液)。蛋白质的终浓度最好在1-10pmol/μL之间。如果是Reverse-Phase-HPLC制备的样品,则可以不加MS专用溶解液而直接使用。
- 一定要在蛋白质样品真空冻干前将其中的缓冲液、盐、去污剂和变性剂等去除,否则它们会严重影响蛋白质晶体的形成,没有蛋白晶体的形成就不能进行MALDI分析。
- 称量1mg左右的基质干粉到一干净的EP管中,按每mg CCA加100μL基质液成份二的比例加入基质液成份二,混匀后离心。
- 此是用于结晶用的饱和溶液,可能有沉淀,故需要离心。
- 基质液最好新鲜配制。本试剂盒提供50mg,足够配50次200μL的基质液。
- 选用下面两种上样法之一上样。也可以自选其他的上样方法。
- 将蛋白样品真空冻干后加入MS专用溶解液100μL,溶解半小时(期间可以按下步配制基质液)。蛋白质的终浓度最好在1-10pmol/μL之间。如果是Reverse-Phase-HPLC制备的样品,则可以不加MS专用溶解液而直接使用。
- Dried-Droplet法上样
- 将1μL蛋白质样品与1μL新配的饱和基质液混匀。
- 可以多做几个不同的蛋白质样品和基质液的比例,在1:1~10:1均可。
- 用移液器将1μL混合液点到MS仪器的样品靶上,让液体在室温下挥发干净。
- 不要有气泡,枪头也不要触及靶面,也不能搅动上样后的混合液,在未结晶之前不要摇晃。样品靶必须充分清洗干净,以免上次试验的残留样品的干扰。
- 如果样品中含有非挥发性杂质,在此步可以用自备的MilliQ水洗涤晶体一次。
- 将样品靶插入质谱仪内,后续操作按MALDI-TOF仪器使用手册进行。
- 同样方法处理自备对照样品(一般仪器厂家提供)。
- 将1μL蛋白质样品与1μL新配的饱和基质液混匀。
- Thin-Layer法上样
- 用移液器将1μL基质液点到MS仪器的样品靶上,在基质液挥发前迅速进入下一步操作。
- 迅速用移液器将1μL样品点到MS仪器的样品靶上,让液体在室温下挥发干净,一般需要5分钟。
- 将样品靶插入质谱仪内,后续操作按仪器使用手册进行。
- 同样方法处理自备对照样品(一般仪器厂家提供)。
- 同样方法处理标准品(仪器厂商提供)。
- 用移液器将1μL基质液点到MS仪器的样品靶上,在基质液挥发前迅速进入下一步操作。
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